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基因工程疫苗是用DNA重組技術(shù),將編碼病原微生物保護(hù)性抗原的基因?qū)朐嘶蛘婧思?xì)胞,使其在受體細(xì)胞中高效表達(dá),分泌保護(hù)性抗原蛋白。提取保護(hù)性抗原蛋白,加入合適佐劑即制成基因工程重組亞單位疫苗。應(yīng)用重組DNA技術(shù)研制重組亞單位疫苗,必須有合適的表達(dá)系統(tǒng)用于生產(chǎn)目的基因產(chǎn)物。用于該類疫苗生產(chǎn)的表達(dá)系統(tǒng)主要有原核生物、真菌、昆蟲細(xì)胞和哺乳類細(xì)胞。其中,最常用的原核生物是大腸埃希氏菌(E.coli)和枯草桿菌(Bacillus subtilis)。
圓環(huán)病毒基因工程苗兩類:一類是亞單位疫苗,如BI的PCV-2疫苗(CircoFlex)和英特威/SP的PCV-2疫苗(Circumvent),原理是將PCV-2基因組中編碼免疫原性蛋白的ORF2片段插入到中,通過培養(yǎng)昆蟲細(xì)胞中, 昆蟲桿狀病毒即可快速、大量增殖,獲得具備免疫原性的PCV-2核衣殼蛋白,再加入佐劑將其制備成疫苗。另一類是嵌合病毒滅活苗,原理是用PCV-2的ORF2片段置換不致病的PCVl中的0RF2片段,即獲得了PCVl-PCV-2嵌合病毒,具有與PCV-2類似的免疫原性。富道動(dòng)物保健公司研制的PCV-2疫苗即是采用了這種技術(shù),最先認(rèn)為該嵌合病毒可作為活苗應(yīng)用,但試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)活苗中的嵌合病毒易被母源抗體中和,遂將其滅活,加入佐劑后制得PCV-1-PCV-2嵌合滅活苗。雖然產(chǎn)品生產(chǎn)本身的費(fèi)用不一定高,但產(chǎn)品研究和開發(fā)的費(fèi)用通常都較高。免疫原性通常比復(fù)制性完整病原體差,需要多次免疫才能得到有效保護(hù);全病毒滅活疫苗是將免疫原性優(yōu)良的PCV-2在PK15細(xì)胞中增殖獲得高效價(jià)的全病毒抗原(104.5TCID50/ml),若從PK15中克隆出對(duì)PCV-2更為敏感的克隆細(xì)胞PKK,再經(jīng)微載體懸浮培養(yǎng)生產(chǎn)工藝就可以生產(chǎn)出效價(jià)更高(107.0TCID50/ml)的全病毒抗原。只要病毒抗原效價(jià)高于106.0TCID50/ml就可以達(dá)到制苗要求,然后通過現(xiàn)代滅活技術(shù)和工藝讓病毒完全失去感染性,加入礦物油佐劑就可以制備出有效的全病毒滅活疫苗。全病毒滅活疫苗使用油質(zhì)佐劑免疫保護(hù)效果遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于水質(zhì)佐劑(這也是五號(hào)病、流感疫苗使用油佐劑的原因),其中法國(guó)SEPPIC公司的Montanide ISA 206雙相油乳劑(W /O/W)更安全、穩(wěn)定、有效,品質(zhì)最為卓越。